user8187

دانشگاه علوم بهزیستی و توانبخشی
گروه ژنتیک
پایان نامه کارشناسی ارشدرشته ژنتیک
بررسی هفت ژن جدید عامل ناشنوایی مغلوب غیرسندرمی در 100 خانواده ایرانی
نگارش: ریحانه حاجی علیخانی
استاد راهنما: دکترحسین نجم آبادی
استاد مشاور: دکترکیمیا کهریزی
چکیده فارسی
ناشنوایی یکی از شایع ترین بیماری های حسی است که 1 در 1000 نوزاد به آن مبتلا می شوند. 60% از ناشنوایی هاژنتیکی بوده که 70% از موارد غیر سندرومی و دارای توارث اتوزومال مغلوب می باشد. تا به امروز بیش از 50 ژن برای ناشنوایی غیر سندرومی اتوزومال شناسایی شده است. در ایران، ناشنوایی به دلیل ازدواج های خویشاوندی یکی از شایع ترین بیماری های ارثی است.
هدف از این مطالعه بررسی شیوع هفت ژن(GJB4, GJC3, SLITRK6, SERPINB6, NESP4, CABP2, and OTOGL) شناخته شده برای ناشنوایی مغلوب غیرسندرومی در صد خانواده ایرانی که دارای ازدواج خویشاوندی و بیش از دو فرد مبتلا می باشند است.
روش انجام مطالعه فوق، بررسی آنالیز پیوستگی بااستفاده از مارکرهای STR که در مجاورت ژن مذکور قرار دارند می باشند. در صورت مشاهده الگوی پیوستگی، آنالیز توالی یابی و مطالعات تکمیلی صورت خواهد پذیرفت.
نتایج مطالعه، دو خانواده به ژن GJB4 پیوستگی نشان دادند، شش خانواده به ژن GJC3 پیوستگی نشان دادند، یک خانواده به ژن SLITRK6 پیوستگی نشان داد، یک خانواده به ژن SERPINB6 پیوستگی نشان داد، هشت خانواده به ژن NESP4 پیوستگی نشان دادند، دو خانواده به ژن CABP2 پیوستگی نشان دادند، و شش خانواده به ژن OTOGL پیوستگی نشان دادند که با بررسی توالی یابی اگزون های ژن مربوطه تغییری در ژن مذکور مشاهده نگردید. این نتایج بیانگر شیوع بسیار کم جهش در این هفت ژن در جمعیت ایرانی می باشد.
واژه های کلیدی: ناشنوایی غیر سندرمی، توارث مغلوب اتوزومی ، نقشه کشی هموزیگوسیتی، توالی یابی به روش سنگر، ایران.
فهرست مطالب
فصل اول کلیات تحقیق
مقدمه ………………………………………………………………………………………………………………………………. 1
بیان مسئله ………………………………………………………………………………………………………………………… 3
اهمیت و ضرورت تحقیق ……………………………………………………………………………………………………… 4
اهداف ………………………………………………………………………………………………………………………………… 6
هدف کلی …………………………………………………………………………………………………………………………. 6
اهداف اختصاصی ………………………………………………………………………………………………………………. 6
اهداف کاربردی ……………………………………………………………………………………………………….. 6
سؤالات و فرضیه ها …………………………………………………………………………………………………………….. 7
فصل دوم پیشینه تحقیق
آناتومی گوش ……………………………………………………………………………………………………………………… 8
گوش خارجی ……………………………………………………………………………………………………………………. 8
گوش میانی ………………………………………………………………………………………………………………………. 9
گوش داخلی …………………………………………………………………………………………………………………….. 9
طبقه بندی ناشنوایی …………………………………………………………………………………………………………. 11
طبقه بندی بر اساس سن شروع ……………………………………………………………………………………….. 11
طبقه بندی بر اساس شدت ………………………………………………………………………………………………. 12
طبقه بندی بر اساس علت فیزیولوژیکی ……………………………………………………………………………. 12
ژن های شناخته شده مرتبط با ناشنوایی …………………………………………………………………………….. 13
بررسی ژن ها ……………………………………………………………………………………………………………………. 22
ژن GJB4 ……………………………………………………………………………………………………………. 22
ژنGJC3 ……………………………………………………………………………………………………………… 25
ژن SLITRK6………………………………………………………………………………………………………. 26
ژن SERPINB6 ……………………………………………………………………………………………………. 28
ژنNESP4……………………………………………………………………………………………………………. 29
ژن CABP2…………………………………………………………………………………………………………. 30
ژن OTOGL…………………………………………………………………………………………………………. 31
فصل سوم روش شناسی تحقیق
نوع مطالعه ………………………………………………………………………………………………………………………… 34
جامعه، نمونه آماری و روش نمونه گیری ………………………………………………………………………………. 34
روش جمع آوری داده ها …………………………………………………………………………………………………….. 34
متغیره ها ………………………………………………………………………………………………………………………….. 34
روش شناسی تحقیق …………………………………………………………………………………………………………. 35
ملاحظات اخلاقی ………………………………………………………………………………………………………………. 36
مواد و روش ها ………………………………………………………………………………………………………………… 37
استخراج DNA …………………………………………………………………………………………………….. 37 چگونگی استخراج DNA ……………………………………………………………………………………….. 38
لیز سلول ……………………………………………………………………………………………………………….. 39
هیدراسیون DNA………………………………………………………………………………………………. 40
تعیین غلظت DNA استخراج شده ……………………………………………………………………………….. 41
روش تعیین غلظت …………………………………………………………………………………………………………. 42
نحوه خالص سازی نمونه های آلوده به پروتئین ………………………………………………………………. 42
آنالیز پیوستگی برای بررسی 7 جایگاه ژنی مرتبط با ناشنوایی اتوزومی مغلوب غیرسندرومی .. 43
انتخاب مارکرهای STR ………………………………………………………………………………………. 44
ژن GJB4 ……………………………………………………………………………………………………….. 45
ژنGJC3 …………………………………………………………………………………………………………. 46
ژن SLITRK6 ………………………………………………………………………………………………….. 47
ژن SERPINB6 ………………………………………………………………………………………………. 48
ژنNESP4 ………………………………………………………………………………………………………. 49
ژن CABP2 …………………………………………………………………………………………………….. 50
ژن OTOGL ……………………………………………………………………………………………………. 51
تعیین هتروزیگوسیتی مارکرهای STR در جمعیت ایران ……………………………………….. 52
واکنش زنجیره ای پلیمراز ……………………………………………………………………………………………….. 53
مواد لازم برای واکنش PCR …………………………………………………………………………………………… 54
روش انجام PCR …………………………………………………………………………………………. 57
الکتروفورز ……………………………………………………………………………………………………………. 60
الکتروفورز با ژل پلی آکریل آمید ……………………………………………………………….. 61
مواد لازم جهت الکتروفورز ژل پلی آکریل امید ……………………………………………. 62
طرز تهیه ژل اکریل امید 8 درصد ……………………………………………………………….. 63
رنگ آمیزی ژل به روش نیترات نقره …………………………………………………………… 65
مواد لازم جهت رنگ آمیزی نقره …………………………………………………….. 65
روش رنگ آمیزی نیترات نقره ………………………………………………………… 66
بررسی ژل های پلی آکریل آمید …………………………………………………….. 67
پیدا کردن جهش به روش مستقیم تعیین توالی ……………………………………………………… 68
الکتروفورز محصولات PCR بر روی ژل آگارز …………………………………………….. 70
مواد لازم جهت انجام الکتروفورز DNA برروی ژل آگارز ………………… 70
روش کار ……………………………………………………………………………………….. 71
توالی پرایمرهای مورد استفاده برای تکثیر ………………………………………………….. 72
روش آنالیز نتایج حاصل از Sequencing …………………………………………………… 74
فصل چهارم تجزیه و تحلیل و بیان نتایج حاصل از تحقیق
نتایج حاصل از مطالعات آنالیز پیوستگی ………………………………………………………………………….. 75
مارکرهای دارای فرکانس آللی بالاتر ………………………………………………………………………. 75
نتایج آنالیز پیوستگی در خانوادهای ناشنوا با

متن کامل در سایت homatez.com

NameEmailWebsite

پاسخ دهید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *